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手术室无菌操作的关键作用在于减少手术感染，而影响切口愈合等安全因素较多，如空气环境、接触性污染等，接触性污染主要在敷料、手术器械、缝合材料、医护人员皮肤接触等，因此，相关操作的无菌化管理则直接影响手术感染的管理效果。那么在进行手术时，该怎么怎么进行无菌操作呢？
1.手术进行中，所有工作人员均要严格执行无菌技术操作。洗手护士不得从术者背后传递器材；巡回护士不可用手越过无菌台传递物品；手术器械的放置不能超过无菌车栏杆。
2.手术人员有必要调换位置时，应稍离开手术台，背对背地进行交换，并注意不得污染手臂及无菌区域。
3.凡已打开放在无菌台上的备用物品，不论使用与否，均不得再放回无菌容器里，必须重新灭菌后才能使用。
4.切口边缘应以大纱布垫或手术巾（洞巾）遮盖，并用巾钳或缝合线固定，仅暴露手术切口， 使用手术薄膜保护切口。
5.切开空腔脏器前，要先用纱布垫保护周围组织，以防止或减少污染，用手术薄膜保护切口。
6.手术中用过的器材要及时擦净血迹（可以用擦手纸），以减少细菌污染及增殖。接触过肿瘤及胃肠腔的刀剪等器械，应视为已遭污染，必须与其他器械分开，单独放置和处理。
7.手术开始后通向室外的正门不再开启。手术间的人员应避免不必要的活动，参观手术人员要与手术区保持30-40cm以上的距离。
8.给手术者擦汗时，术者的头部应转向侧面并用湿毛巾擦拭；手术间内不得做与本次手术无关的任何活动，如叠单、作敷料等。
9.为缩短手术时间，手术器械和用具应使术者得心应手。
10.术后需置引流管的病人，引流管的位置 从离切口较远的体壁引出。
11.术毕缝合切口前，应先用消毒液涂擦切口两侧的皮肤；缝合时须将组织准确地对合，避免遗留死腔，缝线不宜过紧过密。缝合后，再一次用消毒液涂擦切口两侧的皮肤；然后用无菌纱布覆盖、包裹或用手术敷料贴敷盖。